产品货号：
WE0101
中文名称：
Taq DNA聚合酶
英文名称：
Taq DNA Polymerase
产品规格：
500U|2500U|10000U
发货周期：
1～3天
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Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermus aquaticus polymerase。该蛋白分子量为94kDa，具有5'→3' DNA聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，无3'→5'外切酶活性，酶延伸速度2kb/min，可以扩增长度达5kb的片段。扩增得到的PCR产物3'端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本制品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。
| 组分 | 500U | 2500U | 10000U |
| Taq DNA Polymerase(5U/μL) | 100μL | 5×100μL | 2×1mL |
| 10×PCR Buffer(15mM Mg2+) | 1.8mL | 5×1.8mL | 8×5mL |
保存：-20℃
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
- 经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
- 经检测无外源核酸酶活性；
- PCR方法检测无宿主残余DNA；
- 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
- 室温存放一个月，无明显活性改变。
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
- PCR反应体系(50μL)：
成分 用量 终浓度 10×PCR Buffer 5μL 1× dNTP Mix(10mM each) 1μL 200μM each Forward Primer(10μM) 2μL 0.4μM Reverse Primer(10μM) 2μL 0.4μM Template DNA <0.5μg <0.5μg/50μL Taq DNA Polymerase 0.25～0.5μL 1.25～2.5U/50μL ddH2O 至50μL - 引物浓度请以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
- PCR反应条件:
步骤 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 2min 1 变性 94℃ 30s 25～35 退火 55～65℃ 30s 延伸 72℃ 30s 终延伸 72℃ 2min 1 - 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
- 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本制品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2kb/min。
- 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
- 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
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